酒糟原料能够当作饲料来用，但如果直接饲喂动物可能会造成它们出现营养不良、消化不良等情况，严重还可能会导致它们出现酒精中毒。而通过酒糟发酵，就能够借助益生菌的代谢过程对酒糟内的有害物质吸收和分解，从而达到无毒化处理的效果。将酒糟当作下脚料，具有价格低廉的特点，能够有效当作养殖行业补充的原料，具有很好的使用效果和经济效益，而这也推动了酒糟发酵饲料的发展。

一、试验材料和方法

1、试验材料

试验材料主要包括菌种和培养基。其中菌种主要包括产出甘露聚糖酶的枯草L1芽孢杆菌、产出木聚糖酶的枯草L2芽孢杆菌、产出植酸酶的枯草L3芽孢杆菌，它们都是通过实验室从酒糟中筛选的原始菌株，提供酒糟的来源是河套酒业酒厂。在培养基中，一种是枯草的芽孢杆菌其种子的培养基，含有1%蛋白胨、1%牛肉膏、0.5%氯化钠成分，在121℃进行20min灭菌处理;还有一种是固态发酵的培养基，含有35%白酒酒糟、65%玉米粉和豆粕粉成分，且玉米粉以及豆粕粉是按照7:3的比例配置的，通过121℃环境条件进行 30min 的灭菌处理。提供酒糟的来源是河套酒业酒厂，而玉米粉以及豆粕粉则是在市场进行购买。

2、试验方法

2.1 菌种液培养法

在试验开展中，先针对3株枯草的芽孢杆菌基于斜面对它们的2环部位实施挑取处理，后将它们分放置到种子的培养基内开展接种。其中对L1与L2培养中，主要设置的环境条件是30℃，并通过180r/min的速度对其实施12h的摇瓶处理，而在对L3培养中，主要设置的环境条件是37℃，并通过180r/min的速度对其实施10h的摇瓶处理。

2.2 制备粗酶液的方法

在完成发酵后，进行50mL量蒸馏水的添加，以4200r/min的速度进行15min的离心处理，此时粗酶液就是所取的上清液。

2.3 对酶活性的检测法

对甘露聚糖酶的活力测定中，采用DNS法。对甘露聚糖酶的活力单位相关定义分析，主要指样品处于37℃与pH7条件下，在每分钟时间内会从0.5%质量分数甘露聚糖的溶液内共释放出相当1μumol量D－甘露糖的还原糖实际所需的酶量值，也就是一酶活力的单位，通过U/g进行表示。

对木聚糖酶的活力测定中，采用DNS法。对木聚糖酶的活性单位相关定义实施分析，其主要是指样品放置在40℃环境以及pH6的条件状态下，其在每分钟时间内会从0.5%质量分数木聚糖的溶液内释放出1μmol的木糖，也就是一酶活力的单位，通过U/g进行表示。

对植酸酶的活力测定中，采用钼黄法来完成。对穷植酸酶的活性单位相关定义实施分析，主要是指样品放置在37℃环境以及pH5.5的条件状态下，样品在每分钟时间内从5mmol/L浓度植酸钠的溶液内所释放出1μmol的无机磷，也就是一酶活力的单位，通过U/g进行表示。

对组分的变化量进行测定中，其中对甘露聚糖的变化量进行测定采用DNS法;对木聚糖的变化量进行测定采用地衣酚和盐酸的显色剂、双波长的差值法;对植酸的变化量进行测定中，采用TCA法;对粗蛋白的测定采用凯氏的定氮法等。

二、试验结果和分析

1 对产酶条件的优化。

1.1 对玉米与豆粕的配比优化

在33℃温度，初始的料水比是1∶1.2，进行接种的量是1mL，且3株菌的接种比例是1∶1∶1，在自然pH和5d发酵时间下，保持其它的条件不变，对玉米粉以及豆粕粉在8∶2、7∶3、6∶4、5∶5的不同比例下会对产酶存在的影响进行研究。

在玉米粉以及豆粕粉发酵期间，它们分别具有碳源、氮源作用，则二者比例会对发酵的过程产生直接的影响。通过研究得知，玉米粉以及豆粕粉在7∶3比例时，L1与L2具有最好的产酶效果，玉米粉以及豆粕粉是6∶4比例时，L3具有最好的产酶条件。对3株菌具体产酶的效果综合考虑，就对玉米粉以及豆粕粉选择7∶3的配比实施试验开展。

2 对酒糟比例的优化

对酒糟实施调节，对其设置出35%、37%、39%、41%的比例，来进行酒糟比例会对产酶影响的研究。选择玉米粉以及豆粕粉是7∶3的比例。

尽管酒糟具有丰富的营养，但具有较高的含酸量，且在酒精进行发酵的动态化期间，还会存在大量副产物的出现，而酒糟含量是会对发酵的动态过程产生影响。通过研究得知，当酒糟含量处在35%～41%范围，在酒糟的含量逐渐增加时，L1与L3具有产酶的效果就逐渐发生下降，但L2实际产酶的效果则逐渐发生提升。因为L3产酶的效果处于37%与39%的时候，具有较大的差别，则选酒糟其最佳含量是37%条件下，实施下一步的试验活动开展。

3、对麸皮比例的优化

在对麸皮添加中，来对麸皮比例实施调节，主要选取比例为0、10%、20%、30%，进而按照其比例的不同来分析可能会对产酶量产生的影响程度。此时试验中，酒糟选择37%的比例状态，而其它的条件则和上一步开展的试验具有相同条件状态。当麸皮处于固态的培养基内，它具有增加培养基空隙的效果，促进空气具备更好的流通性，且麸皮内是具备木糖含量的，而此物质会对菌体内木聚糖酶产生分泌的诱导效应。通过研究得知，在麸皮的添加比例逐渐增大时，L2的产酶效果呈现出上升的状态，但对L1与L3的影响并不是很大，则对麸皮添加就选择用30%的比例。

4、对接种条件的优化

对L1、L2 以及 L3 接种的比例进行调节，分别是4∶3∶3、2∶2∶1、2∶1∶2、2∶1∶1、5∶3∶2、5∶2∶3，来研究接种的不同比例会对产酶造成的影响;后基于2∶1∶2、5∶3∶2比例，对 L3 进行 12h 与和 24h 的提前接种，基于2∶1∶2、5∶2∶3比例，对 L2 进行 12h 与和 24h 的提前接种，来研究接种的顺序会对产酶造成的影响;最后对接种量调节，分别调节成0.8、1.0、1.2、1.4mL，来进行接种量会对产酶造成的影响研究。此时麸皮是30%的比例，其它的条件和上一步的试验条件保持一致。接种量对发酵的周期以及产酶的效果产生直接影响，若接种量太低，会导致菌体的生长出现迟缓，而接种量太大，会造成菌体的繁殖过快。对接种比例的试验以及接种的顺序试验实施结合研究，对接种选择2∶2∶1比例，对L3进行12h的提前接种，此时3株菌具有较好的产酶效果;在接种量是1.0mL，则3株菌的产酶效果最佳。

5、对发酵温度的优化

分别选择30℃、32℃、34℃和36℃的温度条件实施发酵处理，来进行发酵的温度会对产酶造成影响进行研究。在接种中，对L1∶L2∶L3比例选择2∶2∶1，且对L3提前12h进行接种，选择1.0mL的接种量，而其它条件和上一步的试验条件保持一致。通过研究得知，在温度不断升高时，L3的产酶效果发生了提升，但L1与L2最佳的产酶温度则分是34℃、32℃。因为L2于32℃与34℃产酶的效果存在产别的不显著，则选最佳的温度是34℃。

6、对pH的优化

将初始的pH调节成7、7.5、8、8.5、9，来进行初始pH会对产酶造成影响进行研究。对温度控制34℃，其它的条件和上一步的试验条件保持一致。通过研究得知，pH的变化对这3株菌的产酶效果存在不显著的影响，而对L2与L3在pH是8时，具有较好的效果，但是不明显的，就选pH是8实施下一步的试验开展。

7、对料水比的优化

对初始的料水比调节成1∶0.8、1∶1.0、1∶1.2、1∶1.4，来进行初始的料水比会对产酶造成的影响研究。此事选pH是8，其它的条件和上一步的试验保持一致。通过研究得知，L1与L2在初始的料水比是1∶1，具有最好的产酶效果，而L3在1∶1.2效果最好，但其在1∶1与1∶1.2存在差别不大，则选最佳初始的料水比是1∶1。

8、对发酵时间的优化

对发酵的时间控制在2d、3d、4d、5d、6d。通过研究得知，随培养的时间增加，这3株菌具有产酶的效果呈现先增后降的状态，在培养的时间达到5d，此3株菌具有产酶的效果是最佳的，则选培养的时间是5d。

9、对饲料指标的测定

完成优化试验后，对木聚糖、植酸和甘露聚糖分别实施测定，得到它们成分底物实际变化量，如表1所示。