1.3 饲养管理

试验在安徽省马鞍山市金农牧业有限公司羊场进行,在预饲时免疫注射三联四防疫苗,并注射伊维菌素溶液(0.2mg/kg)进行驱虫处理。每7只羊为l圈饲养,保证有足够运动空间,每天定时投喂精料和粗料。每天根据前1天料盆内剩余料重新调整饲喂量,保证其自由采食和饮水,定期消毒。

1.4 样品采集与指标测定方法

1.4.1 生长性能

每天准确记录每组羔羊采食量,观察羔羊生长情况,分别于试验期第1、7、14、21、28天称量每只羔羊体重,并计算精料平均日采食量、粗料平均日采食量、平均日增重(ADG)和料重比(F/G)。

1.4.2 血清生化指标

分别于试验期第1、14、28天08:00,对所有羔羊空腹进行颈静脉采血10mL,静置30min,以3000r/min离心,收集血清,置于-20℃保存待测。采用迈瑞BSL-220全自动生化分析仪进行血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、乳酸脱氢酶(LDH)活性及总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLB)、尿素(UREA)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)含量的测定。血清中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)、白细胞介素1(IL-1)、白细胞介素2(IL-2)、白细胞介素6(IL-6)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)的含量均采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测完成,试剂盒由南京森贝伽生物科技有限公司提供,具体步骤参照说明书。

1.4.3 养分表观消化率

在试验期最后3d,每组随机选取3只羔羊进行消化代谢试验,每组羔羊为同一料盆饲喂,根据剩料量,准确计算采食量。采用直肠取粪法收集粪样,所收集到的鲜粪准确称重,混匀,取总重量的20%作为样品,并按100mL/kg加入10%的盐酸,置于-20℃保存。在65℃条件下烘干48h,粉碎后置于室温下回潮24h,装于样品袋中备用,饲粮和粪便样品中的干物质(DM)、粗蛋白质(CP)、粗脂肪(EE)、中性洗涤纤维(NDF)和酸性洗涤纤维(ADF)含量测定分别按照GB/T 6435—2006、GB/T 6432—1994、GB/T 6433—2006、GB/T 20806—2006、NY/T 1459—2007的方法进行。

养分表观消化率(%)=100×(饲粮采食量×饲粮养分含量—日排粪量×粪便养分含量)/(饲粮采食量×饲粮养分含量)。

1.4.4 胰腺消化酶活性

在试验期结束空腹称重后每组随机屠宰3只,按《家畜解剖及组织胚胎学》方法采集胰腺,准确称量并记录重量。从头、体、尾3个部位取0.2g左右的胰脏样本,加入1.8mL生理盐水用高速匀浆机配成10%的组织匀浆,经2500r/min4℃离心15min,取上清液备用。胰腺淀粉酶、脂肪酶和胰蛋白酶活性均采用试剂盒(南京森贝伽生物科技有限公司)进行测定,测定方法参照说明书进行。淀粉酶活性单位定义为:在37℃条件下,样品中每毫克组织蛋白质与底物作用30min,水解10mg淀粉定义为1个活性单位(U/mg);脂肪酶活性单位定义为:在37℃条件下,样品中每毫克组织蛋白质与底物反应1min,每消耗1μmol底物为1个活性单位(U/mg);糜蛋白酶活性单位定义为:在37℃条件下,样品中每毫克组织蛋白质每分钟分解蛋白质生产1μg氨基酸定义为1个活性单位(U/mg)。

1.4.5 瘤胃发酵参数

在试验期结束后每组随机屠宰3只收集瘤胃液,用3层纱布过滤,1500r/min离心15min,取上清液于-20℃保存待测。瘤胃液氨态氮(NH3-N)的含量的测定采用改进的比色法测定。瘤胃液挥发性脂肪酸(VFA)含量采用气相色谱仪-质谱仪(GCMSISQLT)检测[色谱柱(TGWAX,30m×0.25mm,0.25μm);自动进样器TriPlusRSH;检测器MSisq。标准品包括:乙酸、丙酸、异丁酸、正丁酸、异戊酸、正戊酸标准品]。

色谱条件:载气氦气(恒流模式、总流量0.8mL/min);进样口温度200℃;离子源温度200℃;连接线温度250℃;采用程序升温,初始温度120℃,6min,以5℃/min的速率升温至150℃,运行2min;进样量为1μL;分流比75∶1;质谱:EI源;轰击电压:70eV;单离子扫描模式:定量离子60、73。

1.5 数据统计

与分析试验数据采用SPSS 17.0统计软件进行单因素方差分析(one-wayANOVA),并采用LSD法进行多重比较,试验数据表示为平均值±标准差,分别以P<0.05和P<0.01作为差异显著和极显著的判断标准。

2 结果

2.1 富硒酵母和枯草芽孢杆菌对湖羊羔羊生长性能的影响

由表2可以看出,各组始重差异不显著(P>0.05)。与对照组相比,富硒酵母组和枯草芽孢杆菌组羔羊的末重极显著提高(P<0.01),平均日增重显著提高(P<0.05),精料和粗料平均日采食量变化均不显著(P>0.05),但是精料和粗料的料重比显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01)。

2.3 富硒酵母和枯草芽孢杆菌对湖羊羔羊养分表观消化率的影响

由表5可知,相比对照组,富硒酵母组和枯草芽孢杆菌组的粗蛋白质、酸性洗涤纤维和中性洗涤纤维表观消化率显著提高(P<0.05),干物质的表观消化率极显著提高(P<0.01);枯草芽孢杆菌组的粗脂肪表观消化率显著提高(P<0.05)。

2.4 富硒酵母和枯草芽孢杆菌对湖羊羔羊胰腺消化酶活性的影响

由表6可知,与对照组相比,枯草芽孢杆菌组胰腺脂肪酶活性和富硒酵母组胰腺胰蛋白酶活性均显著提高(P<0.05),富硒酵母组和枯草芽孢杆菌组胰腺淀粉酶活性变化不显著(P>0.05),但在数值上略有升高。

2.5 富硒酵母和枯草芽孢杆菌对湖羊羔羊瘤胃发酵参数的影响

由表7可知,与对照组相比,富硒酵母组和枯草芽孢杆菌组羔羊瘤胃液NH3-N、乙酸、丙酸、异丁酸、正丁酸含量显著提高(P<0.05);富硒酵母组和枯草芽孢杆菌组瘤胃液的异戊酸、正戊酸含量变化不显著(P>0.05),但在数值上略有提高。

3 讨论

3.1 富硒酵母和枯草芽孢杆菌对湖羊羔羊生长性能的影响

微生态制剂可以促进多种在肠道消化吸收中占主导地位的厌氧菌的生长繁殖,从而促进肠道对营养物质的代谢吸收,提高机体的生长性能。Shi等研究发现,添加酵母硒可以显著提高太白黑羊羔羊的的生长性能。Stewart研究发现在母羊饲粮中添加富硒酵母能够显著提高羔羊的平均日增重。仇武松等研究结果表明,在饲粮中添加枯草芽孢杆菌可以降低羔羊的料重比,从而提高生长性能。本试验研究结果与上述报道一致。然而,也有试验结果显示,微生态制剂对畜禽的生长性能没有显著影响。不同的研究结果存在差异,主要是可能与微生态制剂的菌种特性、添加比例以及动物的日龄、生理状态和营养因素有关。从本试验结果来看,饲粮中添加富硒酵母和枯草芽孢杆菌能够降低料重比,显著提高羔羊的生长性能。但如何发挥其最佳使用效果,还需对微生态制剂的添加剂量和使用阶段进一步研究确定。

3.2 富硒酵母和枯草芽孢杆菌对湖羊羔羊血清指标的影响

本试验对照组、富硒酵母组、枯草芽孢杆菌组之间的血清TP、ALB、GLB含量及ALT、AST活性无显著性差异,说明微生态制剂对湖羊血清中的蛋白质含量无显著影响。细胞因子是免疫系统的重要调节因子,能够影响免疫应答的类型和水平。王兰惠的研究发现给绵羊灌注酵母培养物能够提高血清IgA、IgG和IL-6的含量,显著提高血清IL-2、IFN-γ含量。Rajput等研究发现,枯草芽孢杆菌可以提高绍兴鸭血清中IL-2的含量。Hall等研究发现,在奶牛饲粮中补硒后可增加奶牛血清中的IgG含量。在本试验中富硒酵母组和枯草芽孢杆菌组血清中IgA、IgG和IgM均显著高于对照组,这表明微生态制剂可以提高羔羊机体的免疫力。血清中GSH-Px和SOD活性是反映动物机体抗氧化能力的重要指标。刘强等研究发现在饲粮中添加富硒酵母能够显著提高血清GSH-Px、SOD活性,显著降低血清MDA含量。Faixová等在饲粮中添加富硒酵母,显著提高了羊血清GSH-Px活性。任民等研究发现,在饲粮中添加枯草芽孢杆菌能够显著提高血清GSH-Px活性,显著降低血清MDA含量。本试验中,富硒酵母组和枯草芽孢杆菌组羔羊血清中的GSH-Px和SOD活性也显著提高,血清MDA含量显著下降,这表明富硒酵母和枯草芽孢杆菌能够提高湖羊羔羊的抗氧化能力。

3.3 富硒酵母和枯草芽孢杆菌对湖羊羔羊养分表观消化率和胰腺消化酶活性的影响

国内外的一些研究表明,在畜禽饲粮中合理添加富硒酵母和枯草芽孢杆菌可以显著提高营养物质的表观消化率。张丽娟等研究发现,在饲粮中添加富硒酵母能够提高酸性洗涤纤维的表观消化率。Molnár等研究发现,在肉鸡饲粮中添加枯草芽孢杆菌够提高饲料转化效率。Cho等研究发现,在猪饲粮中添加枯草芽孢杆能够提高饲粮蛋白质消化率。微生态制剂在肠道内产生的消化酶和促生长因子等活性物质,可协同增强对养分的消化和吸收。本试验中,富硒酵母组和枯草芽孢杆菌组羔羊养分表观消化率也显著提升。但是,也有微生态制剂的试验发现没有对养分消化产生影响,这或许与不同的养殖管理模式有关。

淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶作为3类主要的胰消化酶,经胰液分泌与电解质一起进入近端小肠中,在蛋白质、脂肪和碳水化合物的消化中起重要的作用。刘翠玲等研究发现,枯草芽孢杆菌可以显著提高鲤幼鱼胰脏蛋白酶、后肠淀粉酶的活性。李卫芬等研究发现,枯草芽孢杆菌可以显著提高草鱼胰脏中脂肪酶和胰蛋白酶活性。本试验中,富硒酵母组和枯草芽孢杆菌组胰蛋白酶和脂肪酶活性有显著提高,说明对湖羊羔羊消化功能有促进作用。

3.4 富硒酵母和枯草芽孢杆菌对湖羊羔羊瘤胃发酵参数的影响

瘤胃液NH3-N是饲粮中多种蛋白质在瘤胃发酵的重要产物,能够为大约50%的瘤胃微生物合成菌体蛋白质提供氮源。反刍动物瘤胃液NH3-N含量正常数值范围一般维持在6.3~27.0mg/dL。周传社等研究发现,在饲粮添加酵母培养物可以提高山羊瘤胃液NH3-N含量,对于调节山羊瘤胃发酵有促进作用。邓露芳研究发现,在奶牛饲粮添加纳豆枯草芽孢杆菌能够提高瘤胃液NH3-N含量,这也说明枯草芽孢杆菌改善瘤胃发酵参数。反刍动物瘤胃对养分的消化吸收以及微生物动力学过程中可产生大量的挥发性脂肪酸,其主要作用为供能和维持瘤胃环境。朱翱翔等研究发现,酵母硒可以提高湖羊母羊瘤胃液中乙酸和总挥发性脂肪酸含量,从而促进瘤胃发酵。研究发现,枯草芽孢杆菌可以提高奶牛瘤胃液NH3-N、总挥发性脂肪酸的含量,促进瘤胃发酵。本试验中,富硒酵母组和枯草芽孢杆菌组羔羊瘤胃发酵参数得到改善,说明富硒酵母和枯草芽孢杆菌对湖羊瘤胃发酵有促进作用。

4 结论

①饲粮中添加富硒酵母和枯草芽孢杆菌能够提高断奶湖羊羔羊的平均日增重,降低料重比。

②饲粮中添加富硒酵母和枯草芽孢杆菌能够提高断奶湖羊羔羊血清中免疫球蛋白含量和抗氧化酶活性。

③饲粮中添加富硒酵母和枯草芽孢杆菌能够提高断奶湖羊羔羊对养分的表观消化率、胰腺消化酶活性和瘤胃发酵参数,从而提高消化功能。

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