1.5测定指标及方法 　

用于测定纤维含量的样品粉碎过0.84 mm筛，用于测定CP和TCA-SP含量的样品粉碎过0.42mm筛，用于测定氨基酸和GLS含量的样品粉碎过0.25mm筛。对工艺优化用菜籽饼发酵前后的pH及CP、TCA-SP、NDF、ADF、GLS和氨基酸含量进行测定，以及菜籽饼发酵前后扫描电镜分析和蛋白质分子质量分析。 对9个不同来源菜籽饼粕发酵前后的pH及 CP、TCA-SP、NDF、ADF和GLS含量进行测定。

1.5.1养分测定  GLS含量采用氯化钯比色法测定，DM含量通过105℃烘箱干燥 4h测定，CP含量采用凯氏定氮法测定，TCA-SP含量参照NY/T3801-2020 测定，NDF含量 参照GB/T 20806-2006采用Van Soest分析法测定，ADF含量参照 NY/T 1459-2007采用Van Soest分析法测定，氨基酸含量利用氨基酸自动分析仪测定。

1.5.2 pH测定 　 　

称取发酵前后的样品5.0g，加蒸馏水50ml， 搅拌30min后，用预先校正过的pH计测定其pH。

1.5.3电镜扫描分析 　 　

取适量样品粉碎过0.25mm筛后，置于导电胶固定在扫描电镜专用样品台上，用磁控溅射铂金进行喷金处理，再将处理好的样品用扫描电镜（SU3500，日本）进行观察并拍照留存。

1.5.4蛋白质分子质量分析 　 　

将样品碎过0.25mm，取适量样品采用变性结合加热的方法来提取菜籽饼粕蛋白质并进行十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析，具体操作参照文献进行。

1.6数据统计与分析 　 　

采用Excel2010软件对数据进行初步处理， 采用SAS9.4软件对数据进行单因素方差分析(one-way ANOVA)，采用Duncan氏法进行多重比较，以P＜0.05作为差异显著性判断标准。

2.2　酶菌协同发酵菜籽饼的正交试验结果

由表３可知，从极差结果来看，果胶酶对总变化率的影响最大，纤维素酶次之，α－半乳糖苷酶的影响最小，即果胶酶＞纤维素酶＞α－半乳糖苷酶，最优配比组合为纤维素酶∶果胶酶∶α－半乳糖苷酶＝3:3:3，此时总变化率为46.44%。

2.3　酶菌协同发酵对菜籽饼ｐＨ及化学成分的影响

由表４可知，在最优配比组合酶菌协同发酵条件下，菜籽饼发酵后的pH显著低于发酵前（P＜0.05），CP、TCA-SP含量显著高于发酵前（P＜0.05），NDF、ADF、半纤维素、GLS含量显著低于发酵前（P＜0.05），谷氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸及总氨基酸含量显著高于发酵前（P＜0.05）。

2.4　酶菌协同发酵对菜籽饼表面形态的影响

在最优配比组合酶菌协同发酵条件下，电镜观察发酵前后菜籽饼表面形态见图1。在400倍电镜观察下，发酵前的菜籽饼颗粒大，形态不规则；发酵后的菜籽饼颗粒较小，结构较松散。在3000倍电镜观察下，发酵前的菜籽饼表面光滑平整，呈较大的片状，无小孔隙且结构较为完整；发酵后的菜籽饼表面粗糙，呈现不规则分布，孔隙较多。

2.5　酶菌协同发酵对菜籽饼蛋白质分子质量的影响

在最优配比组合酶菌协同发酵条件下，发酵前后菜籽饼的蛋白质分子质量结果见图2。A区域蛋白质分子质量为30～75 ku，B区域蛋白质分子质量为12～23 ku，发酵前菜籽饼的蛋白质在Ａ区域分布有多个条带，发酵后菜籽饼的蛋白质主要分布在Ｂ区域。 

2.6酶菌协同发酵对不同来源菜籽饼粕养分含量的影响

在最优配比组合酶菌协同发酵条件下，对９个不同来源菜籽饼粕进行酶菌协同发酵。

2.6..1　pH及CP、TCA-SP含量

由表５可知，发酵前，9个菜籽饼粕的pH在5.46～5.95，平均值为5.75；发酵后，９个菜籽饼粕的pH在3.92～4.27，平均值为4.06。9个菜籽饼粕发酵后的pH均显著低于发酵前（P＜0.05），其中变化幅度最高的为菜籽饼9，降低幅度为1.98。

由表6可知，发酵前，9个菜籽饼粕的CP含量在37.07%～45.56%，平均值为43.00%;发酵后，９个菜籽饼粕的CP含量在38.85%～46.15%，平均值为43.57%。菜籽粕1、3及菜籽饼9发酵后的CP含量显著高于发酵前（P＜0.05）。发酵前，9个菜籽饼粕的TCA-SP含量在2.11%～3.19%，平均值为2.42%；发酵后，9个菜籽饼粕的TCA-SP含量在5.35%～6.52%，平均值为5.95%。9个菜籽饼粕发酵后的TCA-SP含量显著高于发酵前（p＜0.05），其中变化幅度最高的为菜籽粕1，提高幅度为192.38%。 

2.6.2　NDF和GLS含量

由表7可知，发酵前，9个菜籽饼粕的NDF含量在27.03%～40.39%，平均值为32.61%；发酵后，9个菜籽饼粕的NDF含量在20.62%～34.76%，平均值为26.08%。9个菜籽饼粕发酵后的NDF含量显著低于发酵（P＜0.05），其中变化幅度最高的为菜籽粕7，降低了26.00%；变化幅度最低的是菜籽饼，降低了13.95%。

由表8可知，发酵前，9个菜籽饼粕的GLS含量在18.10～57.64 μmol/g，平均值为29.99μmol/g；发酵后,9个菜籽饼粕的GLS含量在13.62～46.23μmol/g，平均值为22.80 μmol/g。9个菜籽饼粕发酵后的GLS含量显著低于发酵前（P＜0.05），其中变化幅度最高的为菜籽粕１，降低了31.30%；变化幅度最低的是菜籽粕４，降低了16.20%。

3.2　酶菌协同发酵对菜籽饼表面结构和蛋白质分子质量的影响

扫描电镜结果表明，发酵前菜籽饼颗粒大形态不规则，经酶菌协同发酵后，颗粒变小，表面粗糙出现凹凸不平的孔状。这与利用黑曲霉发酵菜籽粕的结果一致。菜籽饼完整细胞壁上的纤维网状结构会保护其他养分如蛋白质和多糖免于被降解或转化，当对菜籽饼进行堆肥发酵后，其纤维素网状结构大部分被破坏。本试验结果显示，酶菌协同发酵后菜籽饼表面结构被破坏，使得表面积增加，在畜禽采食后，增加了肠道消化酶接触饲料的面积，更有利于消化饲料。

菜籽蛋白主要有2种类别，主要是大分子的12S球蛋白（α亚基和β亚基）和小分子的2S白蛋白，其中12S球蛋白的分子质量在30～60 ku，2S白蛋白分子质量约为6、12和21 ku。本试验结果显示，未发酵菜籽饼主要为30～75 ku的大分子蛋白质，而酶菌协同发酵增加了小分子肽（＜15 ku）的分布，这表明酶菌协同发酵在一定程度上将大分子蛋白质分解为小分子肽，进而增加菜籽饼小肽含量，这与研究结果相似。与大分子蛋白质相比，小分子肽更易被家禽肠道所捕获吸收，有利于提高饲料养分消化率。

3.3　酶菌协同发酵对不同来源菜籽饼粕养分含量的影响

与豆粕相比，菜籽饼粕的纤维含量较高，含有抗营养因子，极大限制了菜籽饼粕在畜禽中的应用。而不同菜籽饼粕的营养价值与养分消化率因来源不同、榨油工艺不同而有差异。油菜籽加工副产物可根据加工方式的不同分为高温热榨菜籽饼、低温冷榨菜籽饼以及压饼后浸提的菜籽粕，不同榨油过程中的温度处理生产的菜籽饼粕的养分和抗营养因子含量均有所不同。研究发现，菜籽粕NDF含量与肉鸡代谢能之间存在极显著的负相关关系。研究发现，猪的标准回肠氨基酸消化率随着菜籽粕中NDF等纤维含量的升高而显著降低。因此，提高菜籽饼粕的可消化蛋白质含量，降低GLS及纤维含量，是提高菜籽饼粕营养价值的重要手段。

本试验通过酶菌协同发酵，发现对9个不同来源的菜籽饼粕养分含量均有一定的改善作用。经过酶菌协同发酵后，菜籽饼粕的pH均显著降低。pH的降低可提高畜禽肠道内胃蛋白酶的活性，从而促进对养分的消化吸收。经过酶菌协同发酵后，9个菜籽饼粕的CP含量略有升高，提高的幅度非常有限，在1%左右，说明本试验酶菌协同发酵改善菜籽饼粕的营养价值，对CP含量的提高并不明显，而发酵体系蛋白质含量的变化可能与菌体蛋白的产生有关。菌体蛋白产生量与发酵菌种有关，利用乳酸菌和地衣芽孢杆菌发酵菜籽粕，CP含量提高了12.09%；Shi等用黑曲霉发酵菜籽粕后，CP含量提高了16.90%。本试验采用的枯草芽孢杆菌具有分泌酸性蛋白酶的活性，可促进饲料大分子蛋白质的进一步降解，这与蛋白质分子质量的结果相一致的。本试验测定的9个菜籽饼粕的TCA-SP含量均有大幅度的提高，表明酶菌协同发酵对TCA-SP含量有明显的提高作用。如前所述，TCA-SP主要是由氨基酸残基组成的寡肽，动物吸收寡肽的能力要高于游离的氨基酸。研究发现，菜籽粕经蛋白酶酶解及黑曲霉发酵后TCA-SP含量增加了629.66%。本试验结果与上述结果相似。

菜籽饼粕的纤维含量高于豆粕3倍以上，且饲料原料纤维含量与代谢能存在负相关。与饲喂玉米－豆粕基础饲粮相比，饲喂菜籽饼粕原料的肉鸡代谢能呈线性下降。相对较低的代谢能是限制菜籽饼粕在肉鸡中饲喂效果的主要因素，这通常与纤维含量高有关。本试验中，经过酶菌协同发酵后，9个菜籽饼粕的NDF含量均显著降低，表明本试验选用混合微生物并联合使用适宜的非淀粉多糖酶，均有一定降解9个不同来源菜籽饼粕NDF的效果。植物源性细胞壁结构错综复杂，纤维互相缠绕形成坚固的网状结构，而菜籽饼粕纤维主要是难以被家禽利用的结构性多糖，这种纤维网状结构会将蛋白质及淀粉等可消化养分进行包裹，不容易被分解利用。而非淀粉多糖酶结合微生物进行酶菌协同发酵可对菜籽饼粕中纤维等抗营养因子或大分子结构更具针对性和特异性，这种策略延长了酶与底物的接触与作用时间，能同时提高微生物发酵效果和酶解的效率。有研究表明，细胞壁的纤维网状结构在纤维素酶、果胶酶的相互作用下得以打开并降解，此时微生物进入细胞内部发挥作用，将大分子化合物转变为小肽等小分子化合物，并利用纤维降解产生的可溶性糖转化为乳酸等代谢产物。朱晓峰等报道了在纤维素酶及果胶酶的酶解作用下，菜籽粕的NDF含量由38.12%降至18.68%；王卫卫研究发现，用甘露聚糖、α－半乳糖苷酶协同植物乳杆菌和酵母菌发酵可显著降低棕榈仁粕的NDF含量，本试验结果与上述研究结果相似。

菜籽饼粕中的GLS可在芥子酶作用下分解为硫氰酸酯、异硫氰酸酯、噁唑烷硫酮及氰类化合物，可引起甲状腺肿，导致生长迟缓，故降低了畜禽生长性能。本试验中，经过酶菌协同发酵后，9个菜籽饼粕的GLS量显著降低。降低菜籽饼粕中抗营养因子GLS的含量，是双低菜籽饼粕育种技术的目标，也是采用发酵技术改善菜籽饼粕营养价值的主要目标之一，如利用枯草芽孢杆菌与毛菌混合发酵降解GLS，利用乳酸菌、酵母菌、地衣芽孢杆菌混合发降解GLS。GLS含量的降低缓解了其对畜禽肠道、肝脏及甲状腺的损伤，进而提高畜禽对养分的消化吸收能力。此外，GLS含量的高低与生物发酵菌种有关，本试验结果表明选用酶菌协同发酵不同来源的菜籽饼粕，均可以起到降解GLS的效果。

实战操作技术——棉菜籽饼脱毒变身优质饲料替代豆粕操作新技术

当前豆粕价格很高有些地方货源紧缺，而棉菜籽饼（棉籽粕、菜籽粕）价格相对便宜，棉菜籽饼是棉子、油菜籽榨油后剩下的饼状残渣，蛋白质含量较高，含有各种氨基酸成分。但由于棉菜籽饼中含有植酸、芥子碱等物质，这些物质含有一定的毒性，还会影响动物的消化吸收，不能大量使用，因此不建议直接饲喂给动物！

现在通过微生物饲料发酵剂的除毒脱毒技术，可以成功将菜籽饼变为优质添加饲料，直接按照1公斤发酵的棉菜籽饼（发酵前的重量）代替约0.85公斤豆粕进行使用。饲料发酵剂中的有益微生物，在发酵过程中分泌的代谢产物，可将棉菜籽饼中的毒性物质等有效分解。

豆粕、菜粕、棉粕成分对比

1.豆粕是一种高蛋白原料，无需脱毒即可用作饲料。其中蛋白质含量为40%-48%，赖氨酸含量为2.5%-3.0%，色氨酸含量为0.6%-0.7%，蛋氨酸含量为0.5%-0.7%。2020年11月12日报价每吨在3500元左右。

2.菜粕的粗蛋白含量在34%-38%之间，特点是蛋氨酸含量高（仅次于芝麻饼、粕），赖氨酸含量亦高。而精氨酸含量低，是饼、粕饲料中含量最低的。菜籽粕的有效能值偏低（淀粉含量低、菜籽壳难以消化利用）。矿物质中，钙和磷的含量均高，硒和锰的含量亦高。特别是硒的含量是常用植物饲料中最高的。2020年11月12日报价每吨在2900元左右。

3.棉粕蛋白质含量一般为44.32%，仅次于豆粕的蛋白质含量48%，而高于菜籽粕的蛋白质含量36.04%。精氨酸含量高达3.6%-3.8%，而赖氨酸含量仅有1.3%-l.5%，只有豆粕的一半。2020年11月12日报价每吨在3000元左右。

是否需要脱毒处理

1.豆粕无需经过脱毒即可用作饲料。而且豆粕中富含蛋白质和多种氨基酸，在不需要额外加入动物性蛋白的情况下，仅豆粕中含有的蛋白质和氨基酸足以平衡家禽和猪的食谱，促进它们的营养吸收。只有当其他粕类单位蛋白成本远低于豆粕时，豆粕才有可能被替代。

2.菜粕菜籽中含有硫葡萄糖苷、芥酸、单宁、皂角苷等不良成分，其中主要是硫葡萄糖苷。硫葡萄糖苷本身无毒，但在一定温度和水分条件下，经过菜籽本身含有的芥子酶的酶解作用而产生异硫氰酸酯、唑烷硫酮和腈类等有害物质。这些物质可引起甲状腺肿大，从而造成动物生长速度下降，繁殖力减退。单宁则妨碍蛋白质的消化，降低适口性。而芥酸阻挠脂肪代谢，造成心脏脂肪蓄积及生长受到抑制。。使用前需进行一定的脱毒处理，并且使用时要加以限制，具体喂量应根据菜粕中有害成分含量而定。经过脱毒处理的菜籽粕喂量可以加大，而“双低”油菜籽生产的菜粕喂量要受限制。同时，应结合菜粕的氨基酸组成特点，适当搭配其它饼粕。

3.棉籽中含有对动物有害的棉酚及环丙烯脂肪酸，尤其是棉酚的危害很大。在制油过程中，由于蒸炒，压榨等热作用，大部分棉酚与蛋白质、氨基酸结合而变成结合棉酚，结合棉酚在动物消化道内不被动物吸收，故毒性很小。另一部分棉酚则以游离形式存在于饼、粕及油品中，这部分游离棉酚对动物毒性较大，尤其单胃动物过量摄取或摄取时间较长，可导致生长迟缓、繁殖性能及生产性能下降，甚至导致死亡。幼小动物对棉酚的耐受能力更低。由于棉籽饼、粕中游离棉酚对动物有害，因此，在使用棉饼、粕时，要根据饲喂对象及饼粕中游离棉酚的含量加以限量。反刍家畜在有优质粗料及多汁青料的情况下，棉籽饼、粕的用量不受限制，不会造成中毒。对单胃动物要限制喂量，最好使用经过脱毒处理的棉籽饼粕。同时，使用棉籽饼、粕配制饲粮要注意氨基酸平衡，尤其是棉籽饼、粕的赖氨酸含量低，且利用率差，应注意添加赖氨酸。

发酵操作技术

发酵棉菜籽饼其实也是一个脱毒技术，具体操作如下：

1.仔细检查棉菜籽饼，剔除棉菜籽饼中严重变质发霉的部分，轻度发霉的原料可以忽略，因为微生物发酵能够脱霉。

2.将棉菜籽饼粉碎并添加适量的玉米粉淀粉类的能量饲料等，调节饲料营养比例。

3.每吨棉菜籽饼加入2公斤食盐、玉米粉（其它淀粉、面粉次粉等也可以，或者粉碎的生红薯300公斤也可以）100公斤、“99多功能饲料发酵剂”1包（500g/包，市场售价约25元，以高浓度乳酸菌、酵母菌、复合酶制剂的专业发酵剂）。

4.在混合物料中添加适量水分，使混合物料含水量保持在55%左右，以“手抓一把并紧握，无水滴落，松手后轻触即散”为宜，一般上述配方中需要加入清水约500-600公斤。

5.发酵方式根据实际环境条件各异，在桶、缸、塑料袋等容器中发酵均可。

6.发酵时要尽可能排尽空气进行密封发酵。如果使用的发酵容器有密封不严实的隐患，要在一开始就在其外层包裹一层塑料袋并扎紧。发酵过程中不能启封。

7.发酵时间受环境温度影响，通常夏季发酵2-3天，冬季发酵5-7天即可完成。发酵完成后，有较为强烈的酸香味，ph值在3-4。

规模运用混合发酵现场

塑料缸、饲料袋（有内膜）均可做发酵饲料

采用池子发酵

发酵完成的棉菜粕饲喂动物技术

需要注意的是，发酵后的饲料酸度较低，不可以取代禽畜全部日粮。其他类发酵饲料同理。饲喂时根据不同情况，将发酵饲料按照一定比例添加到日粮中，发酵完成的棉菜粕为湿料，具体使用量每大概1.5-2公斤发酵棉菜粕（湿料）代替动物日粮配方中1公斤豆粕的使用量进行代替使用，与其它饲料混合后直接饲喂，由于棉菜籽粕蛋白较高，最高使用量不要超过禽畜日粮饲喂量的40%（湿料重量）。如果发现发酵饲料过酸适口性变差，可在饲喂前在阳光下晒1-2小时，或添加适量的碳酸氢钠（小苏打）即可改善。

发酵过程中与发酵后使用过程中，发酵的容器要一直保持密封状态，可以长时间保存（一年左右）。

当前养殖业成本高居不下，而饲料成本是其中最高的，利用廉价原料发酵饲料（包括一些轻度发霉的粕类低价收回）是极佳解决办法。通过微生物饲料发酵剂的发酵作用，可以将轻度霉变饲料变成优质饲料，将不易消化的物质分解为可被畜禽吸收的小分子糖类、氨基酸等。同时发酵饲料中富含有益微生物、酶制剂、酸化剂等，可调节畜禽肠胃微生态环境并进一步提高饲料利用率。发酵饲料气味清香，提高了饲料的适口性，加上发酵饲料中有大约4℃的酒度，能够促进动物新陈代谢促进健康抵御疾病，是当前养殖业发展中重要的一环。

本技术也可以同样发酵菜籽粕（饼）、棕榈粕等，方法同上。

【视频】部分发酵饲料养猪鸡鸭带给你无臭味健康无抗养殖效果

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2020年已全面禁抗，我们之前经常在饲料中添加的抗生素进行促生长行为将是违法，否则面临巨额罚单。如何既能够促进动物生长又能够形成无抗养殖呢？其实中草药在促进畜禽养殖健康和生长、改善肉蛋奶品质大有可为，特别是将中草药发酵后效果提升4-28倍等好处，这个实施方案比你想象中效果更好，运用的没有不被效果折服的，值得尝试验证

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