酒糟酵母培养物部分替代饲料对草鱼抗应激相关酶活性的影响
摘要：研究旨在探讨部分替换饲料对草鱼抗应激相关酶活性的影响。试验选用95～105g的草鱼450尾，随机分成5个试验组，每组3个重复，分别饲喂酒糟酵母培养物替换0（对照组）、8%、10%、12%、16%的试验饲料，进行为期10周的养殖试验。结果表明：在肝脏中，各酒糟酵母培养物组的超氧化物歧化酶（SOD）活性显著低于对照组（P＜0.05），12%酒糟酵母培养物组总抗氧化能力（T-AOC）明显低于其他试验组，谷丙转氨酶（ALT）的活性在替换量10%、12%时最高；在血清中，8%、10%酒糟酵母培养物组的SOD活性明显高于对照组（P＜0.05）；各试验组草鱼在氨氮浓度100mg/L胁迫48h，对照组死亡率最高达70%，12%替换组死亡率最低仅为36.7%。结果显示，酒糟酵母培养物部分替换基础饲料可以增强血清和肝脏中抗应激相关酶的活性，且12%为最佳替换量。
酵母培养物（yeast culture）为发酵产业的副产物，包含蛋白质、氨基酸、多糖、无机盐、未知功能等免疫生长因子。纯净的酵母在水产养殖中可以作为微生态保健品进行添加，可以提高养殖品种的生长速度和饵料利用率。酵母已经在草鱼、团头鲂、南美白对虾、鮰鱼、中华鳖、星斑川鲽等水产物种上开展研究。
水生动物属于变温的低等生物，对环境的适应能力差，由于其不完善的免疫系统当遇到不适的外部环境胁迫时，容易造成不可逆的伤害。通过改善其生存环境、依靠保健类添加剂是提升养殖成功率的关键。张红梅等在研究酵母甘露寡糖对鲤鱼非特异性免疫时发现，其可以增加免疫细胞的数量。李高锋对团头鲂饲喂含2000mg/kg的酵母培养物的饲料明显提高体内 SOD、ALT、AST、LYS 等酶的活性。另外在异育银鲫、大西洋鲑喂酵母培养物的试验中得到的结论类似。本研究探索部分基础饲料被酒糟酵母培养物替换后对草鱼抗应激相关免 疫酶活性的影响及抗高氨氮胁迫的能力。
1 材料与方法
1.1 试验材料
试验鱼购自团风百容水产基地，经过2周暂养，达到生理状态稳定后，选取体格健壮，体重在95～105g之间的草鱼鱼种 450 尾，随机分成 5 组，每组 3 个重复，每个重复 30 尾鱼。各组试验鱼投喂用酒糟酵母培养物分别替换等重量的基础饲料 0（对照组）、8%、10%、12%、16% 的试验饲料。基础饲料是购自湖北海大饲料有限公司的草鱼专用配合饲料，酒糟酵母培养物的营养成分见表1，酒糟酵母培养物部分替换后各试验组饲料的营养水平见表2。
1.2 饲养管理
试验鱼饲养在1m3圆形钢化玻璃缸中，除饲料等外界条件均相同。整个饲养期间保持水质稳定，水温24～28℃，容 氧5.0mg/L以上，pH值6.8～7.5。整个试验持续时间10周，每天9：00和16：00各投喂一次。
氨氮胁迫：将经过饲喂10周的试验鱼转移到氨氮浓度100mg/L的1m3圆形钢化玻璃缸中，每缸30尾鱼，其他试验条件不变，以氯化铵为氨氮来源，进行48h的胁迫试验，统计死亡率。
1.3 样品采集
每个试验组的 3 个重复缸中随机选取 5 尾鱼，取 3 份新鲜肝脏，每份2～5g，立即放入液氮罐中。从鱼体的尾部静（动）脉取血，自然凝固后，4℃冰箱中放置2h，然后3000r/min冷冻离心10min，取上清液。所有样品采集后，在-80℃冰箱保存备用。
1.4 酶活性测定
相关抗应激免疫酶活性选用南京建成生物工程研究所的试 剂盒测定。分别测定超氧化物歧化酶（SOD）、总抗氧化能力（T-AOC）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）。
1.5 数据统计与分析
数据处理采用SPSS 17.0和Origin 8.0软件。运用 SPSS 软件进行单因素方差分析，Origin软件做柱状图。
2 结果与分析
2.1 酒糟酵母培养物对草鱼肝脏和血清中 SOD 活性影响
由图1可知，在肝脏中，各酒糟酵母培养物组草鱼SOD活性显著低于对照组（P＜0.05），各酒糟酵母培养物组间差异不显著（P＞0.05）血清中，各试验组草鱼SOD活性没有呈现明显的规律性，其中，16%酒糟酵母培养物组草鱼血清SOD活与8%、10%及12%的酒糟酵母培养物组间差异显著（P＜0.05），对照组与8%和12%的替换组间差异显著（P＜0.05）。
2.3 酒糟酵母培养物对草鱼肝脏和血清中 AST 活性的影响
由图3可知，在肝脏中，16%、8%、10%的酵母酒糟培养物组间差异显著（P＜0.05）,10%替换组与12%和16%的替换组间差异显著（P＜0.05）。其中10%酵母酒糟培养物组达到最大。在血清中，各个试验组的 AST 没有出现显著差异（P＞0.05）。AST活性的高低反应草鱼肝脏的健康程度，其升高的程度与肝细胞受损的程度相一致，因此，添加12%和16%的酵母酒糟培养物较为适宜。
2.4 酵母酒糟培养物对草鱼肝脏和血清中 ALT 活性的影响
由图4可知，在肝脏中，16%酒糟酵母培养物组草鱼ALT活性与对照组、10%酒糟酵母培养物组差异显著（P＜0.05）,其他试验组差异不显著（P＞0.05）。ALT升高的程度与肝细胞受损的程度相一致，可用来指示鱼体的健康程度。肝脏中12%和16%酒糟酵母培养物组ALT活性较低，说明替换量较为适宜。在血清中，各试验组没有出现显著性差异（P＞0.05）。12%酒糟酵母培养物组ALT活性最低。因此，本研究结果表明，在12%的替换量较合适。
2.5 高氨氮胁迫下酒糟酵母培养物对草鱼的死亡率的影响
由表3可知，各组草鱼在高氨氮12 h开始出现死亡；随着胁迫时间的增加，各组试验鱼的死亡率呈逐渐增长的趋势。对照组的死亡率是最大，在48h达到70%；12%酒糟酵母培养物组死亡率最低仅为36.7%。说明在高氨氮的胁迫下，草鱼机体自身的抵抗制止逐渐失去功能，酒糟酵母培养物能够在一定程度上减缓死亡率。
3 讨论
3.1 酒糟酵母培养物对草鱼抗应激性能的影响
AST主要存在于肝细胞的线粒体和细胞质内。ALT主要存在肝细胞浆，肝组织受到破坏时，进入血液内，相应的酶活性增强。ALT和AST升高的程度与肝细胞受损的程度相一致，可反映鱼体的健康程度。本试验研究发现，酒糟酵母培养物试验组草鱼血清中AST、ALT均没有出现显著性的差异（P＞0.05），其中12%组ALT活性最低。说明添加12%酒糟酵母培养物对草鱼的机体抗应激性能提高最明显，可能由于该培养物中含有氨基酸、小肽、未知的功能的活性因子等起到改善机体的作用。
3.2 酒糟酵母培养物对草鱼抗氧化功能的影响
生物体不仅在正常的生理代谢过程中产生活性氧，自然环境的一些因子也会使活性氧增加，活性氧增加能破坏机体的组成成分，造成伤害。机体为了保持健康的状态，需要体内的SOD、T-AOC维持自由氧的含量。总抗氧化酶能对机体内的自由氧等进行降解。机体中的总抗氧化能力下降时，容易引发炎症及免疫系统等疾病。本试验中，血清中T-AOC的活性无显著性差异（P＞0.05），12%酒糟酵母培养物组草鱼血清中活性最高；另外8%和12%酒糟酵母培养物组的草鱼血清中SOD活性较高，并与对照组差异显著（P＜0.05）。说明酒糟酵母培养物可提高草鱼的抗氧化性，可能的原因是酒糟酵母培养物所含菌群种类丰富，能改善动物肠道健康，增强动物免疫力和抗病力。
3.3 酒糟酵母培养物对草鱼抗高氨氮死亡率的影响
养殖水体中的氨氮是判断水质的重要标准，是水体中最常见的毒性物质。当养殖水体中氨氮含量过高时，可以通过血液进入水产动物的脑部，致使氨中毒，出现昏迷，长时间暴露在高氨氮环境下甚至死亡。本试验研究发现，在100mg/L的氨氮浓度下，各试验组草鱼开始出现死亡。随着时间的延长，各组草鱼的死亡率出现明显差异。陈智威等研究长蛸的氨氮急性胁迫试验，发现在相同的氨氮浓度胁迫下，长蛸的死亡率随着时间延长，逐渐升高；氨氮浓度逐渐增大，死亡率逐渐增加，与本试验结果类似。涂娇等研究罗非鱼饲喂 6 种药物后对80mg/L氨氮浓度胁迫下的死亡率，发现不同的药物帮助罗非鱼抗氨氮胁迫的差异显著。本试验中，对照组48h草鱼的死亡率明显高于各酒糟酵母培养物组，可能是酒糟酵母培养物中的未知功能因子发 挥了微生态制剂的功效，在一定程度上起到药物的效果。酒糟酵母培养物可以替换一部分基础饲料，一方面参与草鱼生长的营养供给，另一方面还能起到抗外界因素胁迫的作用。
4 结论
酒糟酵母培养物可以增强草鱼血清和肝脏中抗应激相关酶的活性，并对高氨氮胁迫具有一定的抗性，且添加量12%较为适宜。
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