导   语

微生物发酵饲料富含小肽、益生菌、有机酸、酶和细菌素等代谢产物，可发挥提高饲料消化率、改善肠道健康、促进宿主免疫系统的发育和调节等作用。现代养殖中，仔猪实行早期隔离断奶并采食高蛋白日粮等导致其肠绒毛受损、紧密连接蛋白降低、菌群紊乱、病毒性腹泻产生、抗病力下降等。国内外研究发现，在仔猪饲粮中添加复合酸化剂能显著提高空肠绒毛高度并降低隐窝深度，提高日增重和饲料转化效率；复合酶制剂能显著提高日粮能量、蛋白质和有机干物质的消化率；复合微生态制剂能改善血液抗氧化指标、降低肠道内容物pH、改善肠道菌群平衡，降低腹泻率。总之，微生物发酵料因富含各种动物所需营养素和代谢产物，能针对仔猪肠道特征，促进肠道消化吸收功能，维护肠道健康。本试验旨在研究微生物发酵料对仔猪生产养殖和替代抗生素的应用效果，为发酵饲料的应用提供参考依据。

微生物发酵料为某公司依托“农业农村部生物饲料国家重点实验室”自主研发，并提供。优选芽孢杆菌、酵母菌、乳酸杆菌和丁酸梭菌4种菌，以玉米、豆粕和黄酒糟等为底物，采用二次梯度发酵工艺进行生产，发酵后活菌数≥2．66x108CFU／g，粗蛋白质为16．51％、酸溶蛋白(占粗蛋白质含量)≥18％、氨基态氮(占粗蛋白质含量)为3．63％。试验仔猪来自吴川市某农牧有限公司，试验地点为某公司养殖试验基地。

试验结束后称重，每个重复取3头猪前腔静脉采血5 mL左右，室温下静止2 h，4℃冰箱放置过夜，4 500 r／min离心10 min，分离血清，-20℃保存待测。使用血红蛋白仪现场采集测定猪只耳缘静脉中血红蛋白(HB)含量；使用深圳雷杜生命科技CHEMRAY 240全自动生化仪测定葡萄糖(GLU)、总胆固醇(CHO)、甘油三酯(TG)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLB)、尿素氮(BUN)含量；采用Elisa方法测定总抗氧化物酶(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量，所用试剂盒均购于南京建成生物工程研究所。

1．3．4    粪便菌群指标

1．3．4．1    样品采集

试验结束后每个重复随机选取3头健康仔猪，使用无菌棉签伸到肛门内挖取新鲜粪便各1g，置于4℃冰上，然后在无菌操作台上检测菌落总数、大肠杆菌、沙门氏菌和乳酸菌数。

1．3．4．2    培养基

菌落总数测定使用平板菌落计数法，琼脂培养基：胰蛋白胨5．0 g，酵母浸粉2．5 g，葡萄糖1．0 g，琼脂15 g，pH为(7．2 ±0．1)，用去离子水定容至1．0 L；大肠杆菌显色培养基：蛋白胨10．0 g，酵母膏粉3．0 g，氯化钠5．0 g，琼脂12．0 g，十二烷基硫酸钠0．1 g，混合色素2．7 g，pH为(7．0 ±0．2)，用去离子水定容至1．0 L；沙门氏菌显色培养基：蛋白胨19．6 g，酵母膏粉3 g，氯化钠5 g，胆盐1．5 g，琼脂12 g，混合色素6．4 g，pH(7．0 ±0．2)，用去离子水定容至1．0 L；乳酸杆菌使用LBS培养基：酵母浸粉5．0 g，胰酪蛋白胨10．0 g，磷酸二氢钾6．0 g，硫酸亚铁0．034 g，硫酸镁0．575 g，葡萄糖20．0 g，乙酸钠25．0 g，柠檬酸铵2．0 g，硫酸锰0．12 g，琼脂15．0 g，pH(5．5 ±0．2)，用去离子水定容至1．0 L。

1．3．4．3测定方法与步骤

在超净工作台分别迅速取粪便内容物0．1 g，置于灭菌15 mL试管中，加入0．9％灭菌生理盐水10 mL，在20℃恒温震荡箱l 50 r／min震荡10 min，使样品充分摇匀，此液为10-2稀释液，然后吸取1．0 mL置于盛有9．0 mL 0．9％灭菌生理盐水的灭菌试管中进行10-3稀释，再依次进行到10-6稀释。分别将10-4、10-5、10-6稀释液100mL涂抹于各培养基上，37℃有氧培养18～24 h后进行菌落计数。各稀释浓度设3个重复。采用平板计数法进行菌落计数，并换算成1g(CFU／g)菌液，即用每克粪样含活菌数表示。

采用SPSS 22．0软件进行统计分析，采用独立样本t检验，结果以平均值 ±标准差表示。P<0．05为差异显著，P>0．05为差异不显著。

由表2可知，与对照组相比，微生物发酵料能提高仔猪ADG和ADFI(P<0．05)，降低腹泻率(P<0．05)。

由表3可知，与对照组相比，微生物发酵料能显著提高仔猪血液中HB、GLU和GLB的含量(P<0．05)；对血清ALT、AST、TP、ALB、TC、TG和BUN无影响。

由表4可知，与对照组相比，微生物发酵料组能提高血清T-AOC和SOD活性(P<0．05)，降低MDA含量(P<0．05)。

由表5可知，与对照组相比，微生物发酵料组能降低仔猪粪便大肠杆菌数，提高粪便乳酸杆菌数(P<0．05)。对粪便总菌数和沙门氏菌数无影响。

3．1   微生物发酵料对仔猪生长性能和腹泻率的影响

本试验基础饲粮含吉他霉素和土霉素钙各50 g／t，吉他霉素为大环内酯类抗生素，主要用于治疗革兰氏阳性菌、支原体及钩端螺旋体等感染；土霉素为四环素类抗生素，对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、支原体、螺旋体、放线菌及某些原虫均有效(中国药典，2015)。目前能有效预防和治疗革兰氏阴性菌的药物添加剂相对较少，本试验微生物发酵料含芽孢杆菌、酵母菌、乳酸菌和丁酸梭菌的总量可达2× 108／g，发酵产生大量乳酸及其他有机酸，使pH降低至4．5，同时能降解植物抗营养因子，产生小肽和游离氨基酸、消化酶、维生素及细菌素等，提高饲料中营养物质的消化和吸收效率。本研究结果表明，微生物发酵料能显著提高仔猪ADFl和ADG，降低腹泻率，而且达到了替代部分抗生素的作用，与绝大部分研究结果相符。推断与发酵料能产生有机酸、细菌素等发挥抑菌作用有关。

3．2   微生物发酵料对仔猪血液指标的影响

HB是红细胞内运输氧的特殊蛋白质，也是最重要的维持内环境pH稳定的缓冲物质，幼年动物HB含量与抗病力密切相关。本试验首次在仔猪上发现微生物发酵料能显著提高血液中HB含量，与王伟光等发现益生菌能改善儿童营养性缺铁性贫血结果一致，均能显著提高血液中HB含量，可能是因为微生物发酵料含促进HB生成的代谢产物，能引起HB合成速度大于代谢速度，从而提高仔猪HB含量，但具体作用机理有待进一步研究。

血清GLU是动物供能的主要物质，其主要是饲粮经消化系统后的代谢产物，仔猪断奶后早期1—7 d血清GLU降低，且肝脏糖酵解关键酶丙酮酸激酶活性及其基因相对表达均降低，但饲粮添加复合微生态制剂可以提高仔猪血清GLU含量，同时也能提高血清TP和GLB含量。本试验中，微生物发酵料能提高仔猪血清GLU和GLB含量，与报道结果一致，说明微生物发酵料能参与或影响营养物质的消化吸收，促进动物免疫功能。血清中TC含量是衡量机体脂代谢的重要指标，反映了机体脂代谢情况。本试验中，微生物发酵料对血清TC、TG无影响，这与Czech等报道的日粮酵母菌降低血清TC和TG含量不符，推测与酵母类型及饲粮添加水平相关。

抗氧化系统是动物机体清除体内多余活性氧，保护自身免受氧化损伤的重要体系，包括非酶类和酶类抗氧化剂。动物机体在生化反应过程中会产生一系列的活性氧，这些活性氧对细胞中的大分子物质例如蛋白质、脂类、DNA等造成损害，且能使脂质过氧化，产生丙二醛等有害物质引起机体损伤。而动物机体抗氧化系统包含各种抗氧化酶如SOD、GPX等和非酶物质如维生素E、维生素A和谷胱甘肽等。本试验表明，微生物发酵料能提高机体T-AOC能力、SOD活性，降低MDA含量，推测因其含各种丰富的有益代谢产物，如维生素、消化酶等均能提高机体自身抗氧化能力，与李涛、王娟娟等试验结果一致。

3．3   微生物发酵料对仔猪粪便菌群的影响

粪便中细菌菌群数量可直接反映动物胃肠道微生物的内环境变化。研究表明，腹泻仔猪因为有害菌群增多抑制了有益菌群生长从而出现腹泻,健康仔猪肠道内有益优势菌群为乳杆菌>拟杆菌>双歧杆菌，腹泻仔猪肠道内有害优势菌群为大肠杆菌>沙门氏菌。本研究所用微生物发酵料能显著降低仔猪粪便大肠杆菌数，提高乳酸杆菌数，与其他学者所做研究报道一致，同时也有降低粪便沙门氏菌的趋势。

饲粮添加4％的微生物发酵料替换配方中4％玉米，同时取消饲粮中50 g／t土霉素钙药物添加剂，可以提高仔猪生长性能，增强仔猪抗氧化能力和血清健康水平，同时改善肠道健康。

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