3 试验鱼及饲养管理

养殖试验在广东溢多利生物科技股份有限公司产学研基地室内循环水养殖系统中进行试验鱼以重复为单位饲养于试验缸每个试验缸内大小为0.6m×0.7m×0.7m(有效水体250L)。饲养期间，每天定时定点投喂(08:30、12:30和16:30)，投喂30 min后收集剩料，烘干称重，并根据摄食情况调整投喂量。饲养期间，每日吸污，同时更换1/10~3/10的水量；水温保持在(27.0±2.0) ℃，pH保持在7.0±0.5，溶解氧浓度>6mg/L。

4 指标测定

4.1 生长性能指标

分别在正式试验开始前和结束后，对各组试验鱼进行计数和称重，计算体增重率(weight gain rate, WGR)、特定生长率(specific growth rate, SGR)、摄食量(feed intake, FI)、饲料系数(feed conversion rate, FCR)。各指标计算公式如下：

WGR(%) =100×[试验末重(g) -试验初重(g)]/试验初重(g)；

SGR(%) =100×[ln试验末重(g) -ln试验初重(g)]/试验天数(d)；

FCR=摄食量(g) /增重(g) 。

4.2 饲料、全鱼常规营养成分分析

养殖试验开始和结束时，将试验鱼分别饥饿24 h，用干毛巾吸干鱼体表面的水分后称重。在养殖试验开始前，取6尾鱼进行初始全鱼营养成分分析。在56 d的养殖试验结束后，每缸取2尾鱼(每组6尾)，用自封袋装好后置于-20 ℃冰箱中保存，用于全鱼营养成分分析。饲料、鱼体的常规营养成分含量采用AOAC(1995)法测定，具体方法如下：在105 ℃烘箱中烘至恒重后测定水分含量；分别采用凯氏定氮法(氮×6.25)和索氏提取法测定粗蛋白质和粗脂肪含量；在马弗炉中灼烧(550℃)后测定粗灰分含量；分别采用乙二胺四乙酸(EDTA)络合滴定法和钼黄比色法测定钙、磷含量。

4.3 营养物质表观消化率测定

在养殖试验开始后2周，每天在投喂后采用虹吸的方法收集粪便，每天收集2次。然后用镊子选择新鲜、完整的、外表带有包膜的粪便于-20 ℃冰箱中保存。试验结束后将收集到的粪便集中，并在烘箱中烘干(60 ℃)备用。测定粪便中粗蛋白质、钙、磷以及饲料和粪便中钇含量，其中钇含量的测定采用等离子体发射光谱法，其他指标的测定方法同1.4.2。营养物质表观消化率的计算公式如下：

干物质表观消化率(%)=100×[1-(饲料中Y2O3含量/粪便中Y2O3含量)]；

某营养物质(粗蛋白质、钙或磷)表观消化率(%)=100×[1-(粪便中该营养物质含量/饲料中该营养物质含量)×(饲料中Y2O3/粪便中Y2O3含量)]。

4.4 血清生化指标测定

饲养试验结束后，每组随机选择15尾鱼，用经肝素钠试剂润洗后的注射器尾静脉采血，离心制备血清后存储于-80 ℃冰箱中。血清中谷草转氨酶(glutamic oxalacetic transaminase, GOT)、谷丙转氨酶(glutamate pyruvate transaminase, GPT)、溶菌酶(lysozyme, LZM)活性和丙二醛(malondialdehyde, MDA)含量均采用南京建成生物工程研究所生产的试剂盒进行测定，具体测定步骤参照试剂盒说明书。

4.5 肠道消化酶活性测定

快速分离经采血后鱼体的肠道，再用液氮速冻后保存于-80 ℃冰箱中。肠道中消化酶如胰蛋白酶(trypsin)、糜蛋白酶(chymotrypsin)、淀粉酶(amylase)、脂肪酶(lipase)活性以及上清液中蛋白质含量均采用南京建成生物工程研究所生产的试剂盒进行测定，具体测定步骤参照试剂盒说明书。

5 数据统计及分析

本试验所有数据均采用平均值±标准差(mean±SD)表示，采用SPSS 18.0对数据进行单因素方差分析(one-way ANOVA)，并结合Duncan氏法对组间数据进行多重比较，以P<0.05作为差异显著水平。

结果与分析

1 生长性能

由表3可知，低磷低鱼粉组的WGR和SGR均显著低于对照组(正常磷和正常鱼粉组，下同)(P<0.05)。与低磷正常鱼粉组相比，在其饲料中添加植酸酶能够使WGR提高11.03%(P<0.05)、SGR提高4.71%(P<0.05)、FCR降低9.60%(P

2 体成分

由表4可知，低磷低鱼粉组的全鱼钙和磷含量均显著低于对照组(P<0.05)。与低磷正常鱼粉组和正常磷低鱼粉组相比，在其饲料中分别添加植酸酶和蛋白酶均能够显著提高全鱼钙和磷含量(P

3 肠道消化酶活性

由表5可知，低磷低鱼粉组的胰蛋白酶、糜蛋白酶和淀粉酶活性显著低于对照组(P<0.05)。与低磷正常鱼粉组和正常磷低鱼粉组相比，在其饲料中分别添加植酸酶和蛋白酶均能够显著提高胰蛋白酶、糜蛋白酶和淀粉酶活性(P

4 营养物质表观消化率

由表6可知，低磷低鱼粉组的干物质、粗蛋白质、钙和磷的表观消化率均显著低于对照组(P<0.05)。与低磷正常鱼粉组和正常磷低鱼粉组相比，在其饲料中分别添加植酸酶和蛋白酶均能够显著提高干物质、粗蛋白质、钙和磷的表观消化率(P

5 血清生化指标

由表7可知，低磷低鱼粉组的LZM活性显著低于对照组(P<0.05)，而MDA含量显著高于对照组(P<0.05)。与低磷正常鱼粉组和正常磷低鱼粉组相比，在其饲料中分别添加植酸酶和蛋白酶均能够显著提高LZM活性和降低MDA含量(P

讨论

1 低磷低鱼粉饲料中添加植酸酶和蛋白酶对草鱼生长性能的影响

在饲料中添加酶制剂既能降解植物性饲料原料中的抗营养因子，同时还可弥补机体内源消化酶的不足，从而促进动物对饲料的消化利用，提高饲料报酬，促进生长。植酸酶可有效降解饲料中的植酸，不仅释放出与之螯合的磷，同时还可将钙和蛋白质等营养物质释放出来供动物吸收利用，减少氮、磷的排泄，提高营养物质利用率，从而促进动物生长。张晓清等的研究表明，添加300 mg/kg植酸酶能够提高建鲤的体增重。Lu等的研究表明，添加200 mg/kg植酸酶能够促进黑鲷的生长，且可以使饲料中磷酸二氢钙的水平从1.5%降至1.0%。在以植物蛋白质为主要蛋白质源的饲料中，添加植酸酶能够促进植酸磷水解，促进鲫鱼(Carassius auratus)生长。本试验结果显示，低磷饲料中添加300 mg/kg植酸酶能够提高草鱼的WGR和SGR，促进生长。这可能是因为添加的植酸酶降解了饲料原料中的植酸，释放出的营养物质改善了草鱼的营养状态，从而达到了促进生长的作用。蛋白酶能够通过水解植物性蛋白质原料中的抗营养因子，提高水解产物中易被消化吸收利用的氨基酸的含量，还能激活内源消化酶活性，从而提高动物对植物性蛋白质的利用率。本试验结果显示，低鱼粉饲料中添加500 mg/kg蛋白酶同样能够提高草鱼的WGR和SGR，促进其生长。Li等在罗非鱼上的研究显示，饲料中添加175 mg/kg的蛋白酶能够显著提高增重，改善生长性能。在虹鳟上的试验结果表明，低鱼粉饲料中添加175 mg/kg蛋白酶能够提高WGR和降低FCR，且提高率和降低率分别达到9.42%和7.80%。在异育银鲫上的试验也有相似的研究结果，低鱼粉饲料中添加不同水平的蛋白酶(120、150和175 mg/kg)均能提高其体增重，且提高率分别达到5.73%、22.40%和14.38%。但在虹鳟的报道中显示，饲料中添加蛋白酶对虹鳟的生长性能无显著影响。不同试验结果存在差异可能与试验饲料类型，试验鱼种类、大小，酶制剂来源和养殖环境不同有关。

目前，植酸酶和蛋白酶的复合使用在部分水产动物上已有报道。在建鲤上的试验表明，低磷(1.5%→1.0%)无鱼粉(6%→0)饲料中添加植酸酶和蛋白酶能够使WGR提高8.88%。在罗非鱼上的试验表明，低磷(1.8%→1.2%)无鱼粉(6%→0)饲料中添加植酸酶和蛋白酶能够使WGR提高13.03%。草鱼是我国主要大宗水产养殖经济鱼类，其肌肉中含有丰富的多不饱和脂肪酸，具有重要的保健功能，深受消费者的喜欢。本研究结果显示，在低磷(2.0%→1.3%)低鱼粉(3.0%→1.5%)饲料中添加植酸酶和蛋白酶能够提高草鱼的WGR和SGR，且提高率分别达到15.71%和6.87%，此结果与上述学者的研究结果相似，表明饲料中添加植酸酶和蛋白酶能够促进动物生长，说明不同酶制剂的配伍使用使得酶功能产生了协同作用，发挥了较大的经济效益。但是，与对照组相比，低磷低鱼粉饲料中添加植酸酶和蛋白酶后各生长指标还是低于对照组，这可能是由于降低了鱼粉在饲料中的使用量，导致鱼粉中一些微量营养元素不能满足鱼体生长所需，从而造成些许差异。

2 低磷低鱼粉饲料中添加植酸酶和蛋白酶对草鱼体成分的影响

关于植酸酶和蛋白酶对动物体成分的影响已有诸多研究报道。Shi等的研究显示，在低鱼粉饲料中添加不同水平的蛋白酶(120、150和175 mg/kg)，对异育银鲫体成分(水分、粗蛋白质、粗脂肪和粗灰分含量)无显著影响。Lin等的研究显示，饲料中添加由蛋白酶、β-葡聚糖酶和木聚糖酶组成的复合酶制剂对罗非鱼全鱼水分、粗蛋白质、粗脂肪和粗灰分含量无显著影响。张晓清等的研究显示，低磷无鱼粉饲料中添加植酸酶和蛋白酶对建鲤全鱼水分、粗蛋白质、粗脂肪和粗灰分含量均无显著影响。此外，张瑞的研究显示，饲料中添加植酸酶能够提高建鲤肌肉粗蛋白质含量，但对粗脂肪和粗灰分含量无显著影响。张璐等在大黄鱼上的研究也有类似的结果，饲料中添加200 mg/kg植酸酶对全鱼粗蛋白质、粗脂肪含量和总能无显著影响。本试验结果显示，各组之间在草鱼全鱼水分、粗蛋白质、粗脂肪和粗灰分含量方面均无显著差异，该结果可能说明鱼类的营养组成相对稳定，不易受到饲养环境和营养条件的影响；但低磷低鱼粉组全鱼钙、磷含量要低于对照组，表明低磷低鱼粉组中的钙、磷不能满足鱼体的生长需要，从而导致生长性能的下降；而在低磷低鱼粉饲料中补充植酸酶和蛋白酶后，其钙、磷的营养状况有所改善。这说明植酸酶和蛋白酶在水解饲料原料时，会释放出钙、磷等营养物质，促进矿物元素的沉积，从而提高动物对营养物质的利用。

3 低磷低鱼粉饲料中添加植酸酶和蛋白酶对草鱼营养物质表观消化率的影响

饲料的营养价值是影响动物生长的重要因素，而生产上常用消化率来评价饲料的营养价值，进而考察其对动物生长的影响。动物的生长与干物质、粗蛋白质等营养物质表观消化率呈正相关。Biswas等的研究发现，在用豆粕部分替代鱼粉的饲料中添加2000 U/kg植酸酶，能够显著提高真鲷(Pagrus major)蛋白质和磷的表观消化率，且分别较豆粕对照组提高3.26%和60.04%。在斑点叉尾鮰上的试验表明，饲料中添加植酸酶能够提高粗蛋白质、粗脂肪和磷的表观消化率。同样，在罗非鱼上也有相似的研究结果。在以豆粕、葵籽粕和菜籽粕分别部分替代鱼粉的饲料中添加蛋白酶、葡聚糖酶和木聚糖酶能够提高虹鳟的粗蛋白质和粗脂肪表观消化率。在异育银鲫上的试验表明，饲料中添加蛋白酶能够提高干物质和蛋白质的表观消化率。本试验结果表明，低磷低鱼粉饲料中添加植酸酶和蛋白酶能够提高草鱼对干物质、粗蛋白质、钙和磷的表观消化率。这可能是由于植酸、蛋白酶抑制因子等抗营养成分对鱼类的消化酶活性有抑制作用，从而抑制了营养物质的消化吸收。植酸酶和蛋白酶的添加一方面可以释放出与植酸结合的营养物质，促进其消化吸收利用，另一方面也能够激活部分内源酶，从而改善肠道对营养物质的消化利用。因此，本试验继续对植酸酶和蛋白酶对草鱼肠道消化酶活性的影响进行了研究。

4 低磷低鱼粉饲料中添加植酸酶和蛋白酶对草鱼肠道消化酶活性的影响

动物的生长与消化能力密切相关，而消化能力受到消化酶活性的影响。胰蛋白酶、糜蛋白酶、淀粉酶以及脂肪酶是动物胃肠道中消化营养物质的关键酶。Liu等的研究发现，外源脂肪酶的添加能够通过提高草鱼肠道中胰蛋白酶、糜蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶的活性提高草鱼的消化能力，从而达到促进生长的作用。关于植酸酶和蛋白酶对动物肠道消化酶活性的影响已有诸多报道。在异育银鲫上的试验表明，饲料中添加植酸酶能够提高肝胰脏和肠道蛋白酶活性。在鲤鱼上的试验表明，低鱼粉饲料中添加蛋白酶能够高前肠和食糜蛋白酶活性。本试验结果表明，在低磷正常鱼粉饲料中添加植酸酶，正常磷低鱼粉饲料中添加蛋白酶以及低磷低鱼粉饲料中添加植酸酶和蛋白酶均能在不同程度上提高草鱼肠道中胰蛋白酶和糜蛋白酶的活性，与上述研究结果相似。其原因可能是植物蛋白质源中含有的抗营养因子(植酸、蛋白酶抑制因子等)可与饲料中的蛋白质、糖类和矿物质等结合，导致底物释放不彻底，对消化酶活性有抑制作用。而植酸酶和蛋白酶可水解饲料原料中的植酸和蛋白酶抑制因子，充分释放结合部分，刺激机体内源消化酶的分泌，从而提高消化酶活性。此外，在淀粉酶和脂肪酶上的研究显示，饲料中添加植酸酶对鲈鱼(Lateolabrax japonicus)胃和肠道中淀粉酶和脂肪酶的活性的影响不显著。常青等的研究报道，蛋白酶的添加对鱼体消化器官淀粉酶和脂肪酶的活性无显著影响。本研究结果显示，饲料中添加植酸酶和蛋白酶可提高肠道淀粉酶的活性，但对脂肪酶的活性无显著影响。综上所述，外源酶制剂的添加能够通过提高消化酶活性，增强动物肠道对营养物质的消化吸收，从而促进生长。而出现部分试验结果不一致的原因可能与酶的种类、用量，鱼的品种、大小，饲料配方以及养殖环境有关。

5 低磷低鱼粉饲料中添加植酸酶和蛋白酶对草鱼血清生化指标的影响

血液中的有效成分可以反映机体新陈代谢机能、组织及细胞通透性和健康状态。GOT和GPT主要参与机体组织中氨基酸的转运。在本试验条件下，各组草鱼血清中GOT和GPT活性无显著差异，这与张晓清等在建鲤上的研究结果相似。LZM是鱼类先天性免疫系统中的重要杀菌物质，主要通过破坏病原菌的细胞壁，进而导致病原菌裂解、死亡。MDA是体内氧自由基攻击生物膜中多不饱和脂肪酸而产生的重要产物，可以反映细胞受损伤以及脂质过氧化程度。Adeoye等研究发现，饲料中添加植酸酶、蛋白酶和木聚糖酶能够增加罗非鱼血清中LZM活性。另一篇在罗非鱼上的研究也有相似的结果，饲料中添加木聚糖酶、蛋白酶、α-淀粉酶和纤维素酶能够提高血清中LZM活性。而在鲟鱼(Acipenser baeri Brandt ♀×A. schrenckii Brandt)上的试验表明，低鱼粉饲料中添加植酸酶对血清LZM活性无显著影响，但能降低血清MDA含量。本试验结果显示，低磷低鱼粉饲料中添加植酸酶和蛋白酶能够提高草鱼血清中LZM活性和降低MDA含量。这些结果说明植酸酶和蛋白酶的添加能够改善草鱼的先天性免疫状况。这可能是因为植酸酶和蛋白酶的添加提高了动物体对蛋白质及其他营养成分的利用率，同时也促进了免疫相关因子的合成，进而提高了机体的免疫力。

结论

在低磷(2.0%→1.3%)正常鱼粉(3.0%)饲料中添加0.03%植酸酶、正常磷(2.0%)低鱼粉(3.0%→1.5%)饲料中添加0.05%蛋白酶、低磷(2.0%→1.3%)低鱼粉(3.0%→1.5%)饲料中添加0.03%植酸酶和0.05%蛋白酶均能够提高草鱼的营养物质表观消化率、肠道消化酶活性和免疫力，从而改善其生长性能。

养殖净化酵素产品说明书

1000毫升/瓶，市场售价约120元，可以用于约10头育肥猪或约200只家禽净化体内抗生素等残留、改善肉蛋品质（提升口感风味）。纯益生菌+酶制剂生物制品，无任何违禁物质（客户可以去质检部门进行检测，我们也可以为您提供质检报告）。

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