我国农业生产所产生的农作物秸秆和尾菜面广量大，但资源化利用率较低，是目前农业面源污染源之一；同时，我国的养殖饲料资源相对短缺。因此，秸秆和尾菜的资源化对农业生产生态环境治理和饲料资源开发有双重意义。据2013年中国统计年鉴报道，我国蔬菜的种植面积和产量分别占世界的43%和49%，2015年我国蔬菜产量达7.8亿t，较2012年增长10.8%，年均增长3.6%。李东霞等认为，蔬菜生产中废弃的尾菜约为20%—67%，推算2015年我国蔬菜尾菜产量为1.56—5.23亿t。另外，我国每年可生产秸秆7亿t以上，其中每年水稻秸秆产量大约为2.4亿t。目前，秸秆的资源化利用率也较低，其中，约33%废弃或露天焚烧、约20%作为生活燃料、仅约15%作为饲料。可见，尾菜和秸秆的资源化利用有待进一步研究。

青贮技术可饲料化处理尾菜或秸秆，但由于农作废弃物各自的营养特点，单独青贮效果不佳。稻草秸秆的水分含量是15%，白菜尾菜水分含量是94.70%。若单独青贮，可能会由于水分含量过低或过高导致青贮效果不佳。依据养分搭配进行混合青贮则可在一定程度上改善青贮效果。李海玲等将白菜尾菜和小麦秸秆按一定比例进行混合发酵，增加了两者饲料化的可利用性。戴洪伟等将玉米秸秆和莲花菜尾菜利用酵母菌进行发酵，提高了原物料中粗脂肪和粗蛋白质含量。综上，混合青贮不仅可以获得较高营养价值的饲料，还可合理配置资源并节约处理成本。鉴于我国水稻和白菜栽培面积都较为广泛，为了更好地开发非饲料资源和缓解农废环境问题，本课题组前期采用不同添加剂对稻草和白菜尾菜进行了混合青贮，经测定提高了饲料的营养价值，但其对瘤胃发酵性能的影响还有待进一步研究。为此，本试验拟通过体外模拟瘤胃发酵，研究稻草和白菜尾菜的混合青贮饲料对瘤胃体外发酵的影响，以进一步筛选适宜于反刍动物瘤胃微生物发酵的复合青贮饲料，为今后饲养试验的开展及其在动物生产中的应用技术研发提供试验资料。

在扬州大学实验农牧场选取4头健康状况良好、体况相近且装有永久性瘤胃痰管的绵羊，用于提供体外模拟瘤胃发酵试验所需的瘤胃液。试验用绵羊的精饲料为玉米和豆粕，粗饲料为燕麦草，精粗比为4:6。每日07:00和19:00等量饲喂，自由饮水。

在前期L9（3³）三因素三水平正交设计青贮试验基础上，筛选出青贮45d且青贮质量较好的3个处理组，以未加添加剂处理的青贮饲料为对照组（表1），进行体外模拟瘤胃微生物发酵试验。每组各设置3个重复，并设置空白组。培养开始后，分别在0、12、24、36h采集培养液样品并测定pH，以进一步筛选出适合瘤胃发酵的青贮饲料优选组。

参照王加启的研究方法配制人工瘤胃缓冲液所需的溶液A、溶液B、溶液C、还原剂、刃天青溶液。试验前按以下比例配制瘤胃缓冲液：向400mL蒸馏水中分别加入0.1mL 溶液A.200mL 溶液B.200mL 溶液C.1mL刃天青溶液和40mL还原剂，将以上溶液混匀通入CO₂至饱和，并预热至39℃。于晨饲前从4只瘘管羊瘤胃中采集瘤胃液，混匀后用4层纱布过滤，装入39℃预热且充满CO₂的保温瓶中后迅速带到实验室，置于39℃水浴锅中保温并向瘤胃液中持续通入CO₂以待接种。称取0.4g底物样品于培养瓶中，每组3个重复。将20mL瘤胃液和40mL缓冲液迅速加入培养瓶中，并向瓶中通入CO₂后将培养瓶置于39℃的恒温振荡水浴锅中培养。在0，12，24，36h进行样品采集，即时测定pH；将1mL培养液加入1mL原虫染色液MFS中，摇匀后静置以用于原虫计数；用滤袋过滤残渣并收集过滤出的培养液，分装保存于-80℃，以待氨氮和微生物蛋白浓度的测定。残渣经洗涤和烘干后用于测定酸性洗涤纤维（ADF）降解率。

采用梅特勒一托利多（FE20）pH计检测pH。参照Broderick等的苯酚一次氯酸钠比色法测定氨氮浓度。参照苏海涯的方法测定培养液中微生物蛋白浓度。首先采用酵母RNA进行标准曲线的制作，再根据标准曲线计算出RNA测定值，最后根据公式计算微生物蛋白浓度：

微生物蛋白浓度(mg/mL)=RNA测定值(mg/mL)xRNA含氮量(17.83%)X稀释倍数X6.25/细菌中RNA含氮量(10%)。

参照王梦芝等的方法进行原虫计数。将采集后的培养液立刻用MFS染色液染色，采用血球计数板进行计数。计算公式：

原虫数（个/mL）=N/4 X D X 16 X 10 X 1000=N X D X 4 X 104

其中，N为计数4个中方格的总数；D为稀释倍数。

参考张丽英的《饲料分析及饲料质量检测技术》（第三版）测定培养前和36 h培养后ADF含量，并计算ADF的36h降解率。

采用Excel 2013对试验数据进行初步整理，再采用SPSS 16.0对不同指标进行单因素方差分析，并用Duncan，s法进行多重比较。差异显著水平判断标准为P<0.05。

由表2可知，各组底物在培养试验期间pH在6.77—6.94。其中，36h时，1组显著高于其他各组。

由表3可知，总体上各组氨氮浓度在20.09—44.39mg/100mL。其中24h和36 h时组间都有显著差异。12h时的氨氮浓度为1组>2组>对照组>3组，1组显著高于3组；24h时为2组>3组>1组>对照组，3个处理组均显著高于对照组；36h时为3组>2组>1组>对照组，2组、3组显著高于对照组。培养期间培养液氨氮浓度的均值则以2组相对较低。

由表4可知，整体上各组皆以24h时微生物蛋白浓度最高。不同处理的青贮饲料对瘤胃体外微生物蛋白浓度有显著影响。其中，0h和24h组间差异不显著，12h和36h时皆以2组的微生物蛋白浓度最高，且培养期微生物蛋白浓度的均值以2组最高。另外，3个处理组ADF的36h降解率均高于对照组，且以3组最高，显著高于对照组。

由表5可以看出，各组的原虫密度随培养时间呈先上升后下降的动态趋势，整体上在12h时各组原虫密度普遍达到最高值。36h时，2组和3组显著高于对照组。培养期原虫密度的均值以3组最高，2组次之。

瘤胃微生物蛋白是反刍动物宿主蛋白质的主要供应来源，且能够提供反刍动物所需蛋白质的40%—80%。

pH是反映瘤胃发酵情况的重要指标，反刍动物瘤胃微生物生长适宜的pH范围为6－7，微生物蛋白合成适宜的pH范围为6.3—7.4。本研究中各组培养液pH（6.77—6.94）均在瘤胃微生物生长和微生物蛋白合成的适宜范围。本研究中以第2组的微生物蛋白浓度较高，这可能是由于其青贮效果较好，可利用养分含量较高以及底物养分降解率较高所致。本课题组前期检测表明，第2组的45d青贮的样品其可溶性糖含量（对照组、1组、2组、3组可溶性糖含量分别为1.93%、1.78%、2.20%、2.12%)和粗蛋白质含量（对照组、1组、2组、3组的粗蛋白质含量分别为5.28%、7.66%、7.50%、6.81%）在各处理组中都相对较高；而ADF含量则相对较低（对照组、1组、2组、3组的ADF含量分别为39.50%、33.48%、31.56%、32.62%），在利于微生物的生长方面有一定的一致性。同时，第2组ADF的36h降解率也相对较高，都说明第2组的处理较有利于瘤胃微生物的生长。

氨氮浓度可以在一定程度上反映瘤胃微生物对蛋白质降解和对氨氮利用的程度。过高会超过瘤胃微生物所需氨氮的最大浓度，多余的氨氮积累不利于瘤胃微生态环境的平衡和微生物的生长。本研究发现，氨氮浓度在培养期一直上升，在24h时氨氮浓度达到瘤胃微生物适宜生长的最大浓度，所以在12—24h时的微生物蛋白浓度也在所测定时间点中较高。但在36h氨氮浓度超过了适宜微生物的浓度，这可能是由于体外培养没有代谢物外移使得氨氮浓度不断积累，其积累超过一定程度则可能抑制微生物的生长。本研究结果也表明，在24—36h时微生物蛋白的浓度有所下降。组间以第2组的氨氮浓度较低，可能是所使用的发酵饲料更适宜于微生物生长，从而使得微生物对氨氮利用较多所致，第2组的微生物蛋白浓度较高也说明了这一点。

瘤胃原虫在维持瘤胃微生态平衡、促进纤维物质和蛋白质利用、降低硝酸盐和亚硝酸盐毒性等方面都至关重要，同时其活性和数量也受培养底物以及培养液环境多种因素的影响。本研究中，原虫密度随着培养时间的延长有所增加，至12h达到最高值。这表明12h时培养液环境较适宜于其生长，而后发酵的持续和代谢物的积累抑制了其增殖。另有研究表明，原虫有可溶性糖趋向性，在吞噬淀粉等底物后会隐匿在秸秆或瘤胃腹囊部，在下一次宿主采食时再次回到瘤胃液中吞噬底物。这可能是本研究中12h原虫密度达到最高之后又有所下降的原因之一。本研究中，以2组和3组的原虫密度较高，可能与上述两组的可溶性糖含量（对照组、1组、2组、3组的可溶性糖含量分别为1.93%、1.78%、2.20%、2.12%）较高有关。

本试验中，第2组青贮饲料的瘤胃微生物蛋白浓度较高，而且其原虫密度较高、氨氮浓度较低。说明稻草秸秆与白菜尾菜比例为4:6混合青贮时，采用植物乳杆菌0.035g/kg、纤维素酶0.250g/kg的组合处理，能够获得品质较好且适宜于体外培养瘤胃微生物的发酵。